CAR-T+溶瘤病毒联合疗法，治疗胶质母细胞瘤的新希望
来源:金斯瑞生物
近年来，以CAR-T为代表的癌症免疫治疗技术飞速发展，已在多种癌症类型中取得重大突破。然而，CAR-T疗法在实体肿瘤治疗方面收效甚微，并且时常会引发细胞因子风暴等严重的副作用反应。
2022年7月20日，日本东京大学和名古屋大学的研究人员在 Molecular Therapy: Oncolytics 期刊上发表了题为：Efficacy of cancer-specific anti-podoplanin CAR-T cells and oncolytic herpes virus G47Δ combination therapy against glioblastoma 的研究论文。该研究首次证明了CAR-T细胞和溶瘤病毒的联合疗法可以阻止胶质母细胞瘤（GBM）的生长并显著提升小鼠存活率，为免疫联合疗法治疗实体肿瘤提供了新的见解。胶质母细胞瘤（GBM）是一种严重的恶性脑肿瘤，患者中位生存期不到两年。此前，该研究团队构建了靶向PDPN位点的第三代CAR-T细胞（NZ-1-CAR-T细胞）并发现其在体外和体内实验中都对PDPN阳性的GMB细胞有特异性抑制作用。然而，PDPN也存在于间皮、淋巴内皮和脑膜等正常组织中，这使得PDPN靶向疗法存在着一些安全风险。为了更精准地靶向GBM细胞，研究人员随后设计了一种针对人PDPN的癌症特异性单克隆抗体（Lp2）。Lp2不会识别表达PDPN的正常细胞，从而有望增强CAR-T疗法对癌细胞的特异性识别能力。研究人员以Lp2为基础构建了新型CAR-T细胞，Lp2-CAR-T细胞。体外实验表明这种新CAR-T细胞可以有效溶解LN229/hPDPN细胞（表达PDPN的GBM细胞），而对PDPN阴性的LN229细胞和Met-5A细胞不产生显著影响。此外，将Lp2-CAR-T细胞与LN229/hPDPN细胞共培养，可以在上清液中检测到100.1pg/ml的干扰素-γ（IFN-γ），这比模拟CAR-T细胞（Mock-CAR-T cell）高出十倍以上。他们还观察到Lp2-CAR-T细胞对患者来源的胶质瘤干细胞TGS01也具有溶解作用。Lp2-CAR-T 细胞体外功能测定（a）与IFN-γ释放量 (b)以上结果表明Lp2-CAR-T细胞在体外对GBM细胞表现出特异性的细胞溶解作用，并且在体内系统注射这些CAR-T细胞后可以显著抑制肿瘤的生长。同时利用CAR-T与溶瘤病毒的免疫联合疗法有望提升CAR-T对实体瘤的治疗效果。溶瘤病毒不仅能直接杀死实体肿瘤，还能引起抗肿瘤免疫反应，破坏肿瘤微环境中的免疫抑制成分，促进CAR-T细胞对实体瘤的浸润。此外，溶瘤病毒还可以裂解癌细胞，从而释放出癌细胞的特征信息，进一步激活CAR-T细胞。在这项研究中，研究人员将溶瘤病毒G47Δ加入到Lp2-CAR-T细胞与LN229/hPDPN细胞的培养皿中，发现IFN-γ的产生量从100.1pg/mL上升到152.9pg/mL。实时细胞增殖实验表明Lp2-CAR-T细胞或G47Δ单独使用也能显著抑制癌细胞增殖，但是两者联合使用会进一步降低LN229/hPDPN和TGS01细胞的活力。此外，与单药治疗相比，使用Lp2-CAR-T和G47Δ的联合疗法时，可以更早观察到抗肿瘤作用。这些体外实验结果表明，Lp2-CAR-T和G47Δ的联合使用比Lp2-CAR-T的单独使用更加有效。研究人员通过注射PDPN转染的LN229/hPDPN胶质瘤细胞在小鼠中建立了皮下肿瘤模型。当肿瘤平均直径达到5mm时，他们开始往小鼠体内注射CAR-T细胞和溶瘤病毒G47Δ，并持续监测小鼠肿瘤大小和存活情况。肿瘤体积的监测结果表明，CAR-T和溶瘤病毒单独使用或联合使用时都能显著阻止小鼠肿瘤生长，但是联合疗法具有最佳的肿瘤抑制效果，接受联合疗法治疗的小鼠，其肿瘤大小不到单独疗法治疗组的1/2。此外，相比于对照组，联合疗法治疗的小鼠，其40天存活率提高了5倍以上。各组小鼠中位总存活期分别为：Mock-CAR-T（33天），G47Δ（35天），Lp2-CAR-T（42天），G47 Δ和Lp2-CAR-T联合疗法（51天）。联合疗法显著延长了小鼠的存活时间，且半数小鼠存活期长达60天以上。另外值得一提的是，在本次动物实验中，没有在小鼠身上观察到不良反应。这些实验结果表明，CAR-T细胞和溶瘤病毒的联合疗法可以阻止人源胶质母细胞瘤（GBM）的生长并显著提升小鼠存活率，有望为CAR-T的实体瘤治疗困境提供新的突破口。
